Высаливание и осаждение белков — как это работает и зачем нужно?
Высаливание — осаждение белка большими концентрациями соли (например, сульфата аммония), которое отнимает у белка воду, не разрушая его. Это мягкий, обратимый способ выделить белок. Другие осадители (кислоты, органические растворители, тяжёлые металлы) часто денатурируют необратимо.
Связи с другими темами
- Раздел 1 → Растворимость и гидратная оболочка
- Раздел 1 → Денатурация
Что такое коллоидные свойства белков и как на них основан диализ?
Белки — крупные молекулы, их растворы коллоидны: частицы большие, не проходят через полупроницаемые мембраны и создают онкотическое (коллоидно-осмотическое) давление. На этом основан диализ — отделение белка от мелких примесей.
Связи с другими темами
- Раздел 1 → Высаливание и осаждение
- Раздел 14 → Онкотическое давление и отёки
Хроматография белков — какие виды стоит знать и на чём основан каждый?
Гель-фильтрационная (по размеру), ионообменная (по заряду), аффинная (по специфическому связыванию). Каждая разделяет белки по одному из их свойств, и вместе они дают высокую чистоту.
Связи с другими темами
- Раздел 1 → Активный центр и специфичность
- Раздел 2 → Выделение и изучение ферментов
Электрофорез белков — что он разделяет и почему так полезен в клинике?
Электрофорез разделяет белки в электрическом поле по заряду (и размеру): при заданном pH разные белки несут разный заряд и движутся к электроду с разной скоростью. Электрофорез белков крови — стандартный диагностический тест.
Связи с другими темами
- Раздел 1 → Изоэлектрическая точка и заряд
- Раздел 14 → Белки плазмы крови
Как измеряют количество белка и почему «280 нм» и биуретовая реакция всплывают постоянно?
Белок поглощает УФ при 280 нм за счёт ароматических аминокислот (триптофан, тирозин) — это быстрый способ оценить концентрацию. Химические методы (биуретовый, Лоури, Брэдфорд) дают цветную реакцию, интенсивность которой пропорциональна количеству белка.
Связи с другими темами
- Раздел 1 → Ароматические аминокислоты
- Раздел 1 → Пептидная связь
Что такое денатурация и чем она отличается от разрушения белка?
Что происходит с яичным белком на сковороде — рвутся ли там пептидные связи?
Денатурация — это разрушение пространственной структуры белка (вторичной, третичной, четвертичной) без разрыва пептидных связей. Первичная структура сохраняется, но белок теряет нативную форму и функцию.
Связи с другими темами
- Раздел 1 → Третичная структура и слабые связи
- Раздел 1 → Пептидная связь
Почему белок амфотерен и что такое его изоэлектрическая точка (pI)?
Белок — амфотерный полиэлектролит: он несёт и кислотные, и основные группы, поэтому его суммарный заряд зависит от pH. Есть особое значение pH — изоэлектрическая точка (pI), где суммарный заряд равен нулю.
Связи с другими темами
- Раздел 1 → Изоэлектрическая точка аминокислот
- Раздел 1 → Электрофорез белков
Что удерживает белок растворённым в воде и почему это важно понимать?
Растворимость белка держится на двух вещах: заряде поверхности (одноимённо заряженные молекулы отталкиваются) и гидратной оболочке (слой воды вокруг полярных групп). Уберёшь и то, и другое — белок выпадет в осадок.
Связи с другими темами
- Раздел 1 → Изоэлектрическая точка
- Раздел 1 → Высаливание и осаждение
Как в целом выделяют и очищают белок — какая общая схема и критерии чистоты?
Выделение идёт по этапам: разрушить клетки (гомогенизация), грубо разделить (центрифугирование, высаливание), затем тонко очистить хроматографией, а чистоту проверить электрофорезом. На каждом шаге следят за удельной активностью.
Связи с другими темами
- Раздел 1 → Высаливание и хроматография
- Раздел 2 → Удельная активность фермента
Как разделяют белки центрифугированием и как определяют их молекулярную массу?
Центрифугирование разделяет частицы по массе и плотности: в сильном поле центрифуги тяжёлые оседают быстрее. Ультрацентрифугирование позволяет разделять белки и оценивать их молекулярную массу через коэффициент седиментации (единицы Сведберга, S).
Связи с другими темами
- Раздел 1 → Электрофорез (SDS, молекулярная масса)
- Раздел 1 → Гель-фильтрация